Rab 25 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424753

Descripción general

Rab25 codifica la pequeña GTPasa Rab25, un miembro de la subfamilia Rab11 que regula el tráfico de membranas, incluido el reciclaje endocítico y el transporte polarizado de receptores e integrinas en células epiteliales. Mediante el control de la gemación, el anclaje y la fusión de vesículas, Rab25 influye en la polaridad celular, la migración y la señalización derivada de receptores de superficie que se acoplan a vías como PI3K–AKT y al reciclaje de receptores de factores de crecimiento. La actividad desregulada de RAB25 se ha vinculado con alteraciones de la homeostasis epitelial y con fenotipos asociados a tumores en múltiples tejidos, lo que la hace relevante para estudiar la invasión, los programas de tráfico asociados a la metástasis y funciones oncogénicas o supresoras de tumores dependientes del contexto. En modelos murinos, la perturbación de Rab25 permite investigar mecanismos de redes de transporte vesicular en el desarrollo y en comportamientos celulares relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rab 25 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rab25 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rab25 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rab25 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rab 25.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rab25 para la investigación de la señalización de Rab 25, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rab25 críticos para la función de Rab 25
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rab25 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rab 25 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Rab 25 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rab25. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rab 25 (m) y el plásmido HDR Rab 25 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rab25 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rab25 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.