Rab 1B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402021-ACT

RAB1B kodiert die kleine GTPase Rab1B, einen zentralen Regulator des vesikulären Transports vom ER zum Golgi sowie innerhalb des Golgi, der Frachtsortierung, Membran-Tethering und SNARE-abhängige Fusion koordiniert. Durch den Wechsel zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen steuert Rab1B die Dynamik des frühen sekretorischen Weges, was die Organellhomöostase, die Verarbeitung von Glykoproteinen und die Proteostase im Sekretionssystem beeinflusst. Signalwege der Rab1-Familie greifen in Autophagie- und stressresponsive Transportprogramme ein und verknüpfen so Membrantransport mit Nährstoffsensorik und Qualitätskontrolle. Eine fehlregulierte Rab1-vermittelte Transportfunktion wurde mit zellulären Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration, Infektionsbiologie und onkogene Signalgebung relevant sind – unter anderem durch veränderte Sekretion und Organell-Stressantworten.

Rab 1B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RAB1B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Rab 1B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RAB1B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RAB1B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Rab 1B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RAB1B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Rab 1B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Rab 1B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RAB1B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.