R7BP Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-415971-LAC

RGS7BP codifica R7BP, un partner di ancoraggio alla membrana e regolazione delle proteine della famiglia RGS7 con attività GTPasica (GTPase-activating) che modella ampiezza e cinetica della segnalazione dei GPCR nei neuroni e in altre cellule eccitabili. Favorendo la localizzazione alla membrana plasmatica e la stabilità dei complessi RGS7–Gβ5, R7BP influenza le vie accoppiate a Gi/o e la modulazione a valle di cAMP, dell’attività dei canali ionici e della trasmissione sinaptica. Questo ruolo di scaffolding collega RGS7BP a processi neurofisiologici, tra cui la terminazione del segnale e la desensibilizzazione recettoriale, con rilevanza per studi su fenotipi neurologici e neuropsichiatrici in cui la regolazione delle reti GPCR è alterata. Un’alterata compartimentalizzazione dipendente da RGS7BP può inoltre influire sul cross-talk tra vie di segnalazione che governa l’eccitabilità cellulare e le risposte adattative.

Le particelle di attivazione lentivirale R7BP (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RGS7BP in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale R7BP (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RGS7BP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di R7BP. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RGS7BP e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.