QKI Double Nickase Plasmid (h): sc-405082-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das QKI Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- QKI Double-Nickase-Plasmid (h) und QKI Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf QKI abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: QKI: sc-517305
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
QKI Double Nickase Plasmid (h) | sc-405082-NIC | 20 µg | $410.00 |
QKI (Quaking Homolog) ist ein RNA-bindendes Protein der STAR-Familie, das die posttranskriptionelle Genexpression durch sequenzspezifische Kontrolle des Prä‑mRNA-Spleißens, des mRNA-Exports, der Stabilität sowie der lokalisierten Translation reguliert. Es ist an Programmen der Oligodendrozyten-Differenzierung und Myelinisierung beteiligt und beeinflusst über die koordinierte Regulation neuronaler und glialer Transkriptome die Organisation des Zytoskeletts sowie Zellschicksalsentscheidungen. Die QKI-abhängige RNA-Prozessierung ist mit Signalnetzwerken verzahnt, die Entwicklungszeitpunkte und Stressantworten prägen, und wirkt sich auf Signalwege aus, die mit Zellproliferation und Differenzierung verknüpft sind. Eine fehlregulierte QKI-Expression oder ein verändertes Isoform-Gleichgewicht wurde mit neurodevelopmentalen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht und in mehreren Krebszusammenhängen beschrieben, in denen verändertes RNA-Spleißen und RNA-Metabolismus zur Krankheitsbiologie beitragen.
QKI Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des QKI-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von QKI abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die QKI-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit QKI-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.