PYST2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404642-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PYST2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PYST2 Double-Nickase-Plasmid (h) und PYST2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DUSP7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PYST2: sc-377106
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PYST2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404642-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PYST2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404642-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dual-Specificity-Phosphatase 7 (DUSP7), auch bekannt als PYST2, ist eine MAPK-gerichtete Phosphatase, die bevorzugt ERK1/2 dephosphoryliert und dadurch inaktiviert und so Amplitude und Dauer mitogengetriebener Signalübertragung formt. Durch eine negative Rückkopplung innerhalb der Ras–Raf–MEK–ERK-Kaskade trägt DUSP7 zur Regulation von Proliferation, Differenzierung und stressadaptiven transkriptionellen Programmen bei. Eine veränderte Expression oder Aktivität von DUSP7 wurde mit einer fehlregulierten MAPK-Signalwegsaktivität in Krebserkrankungen und anderen Zuständen in Verbindung gebracht, in denen ERK-Signale Zellschicksalsentscheidungen steuern, was DUSP7 zu einem hilfreichen Knotenpunkt für mechanistische Untersuchungen der Signalplastizität macht. In humanen Zellmodellen kann die Analyse der DUSP7-Funktion klären, wie eine phosphatasevermittelte Abschwächung nachgeschaltete Effektoren beeinflusst, darunter Immediate-Early-Gene und Zellzyklusregulatoren.
PYST2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DUSP7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DUSP7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DUSP7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DUSP7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.