PTPMT1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403905-ACT

PTPMT1 kodiert eine in den Mitochondrien lokalisierte Protein-Tyrosin-Phosphatase, die in der inneren Mitochondrienmembran sitzt und den Phospholipidstoffwechsel reguliert, insbesondere die Dephosphorylierung von Phosphatidylglycerophosphat während der Cardiolipin-Biosynthese. Durch die Ausprägung der Cardiolipin-Zusammensetzung beeinflusst PTPMT1 die Funktion der Atmungskette, die Architektur der Mitochondrienmembran und die Energiehomöostase, mit nachgeschalteten Effekten auf das Redoxgleichgewicht und die Anfälligkeit für Apoptose. Eine veränderte PTPMT1-Aktivität wurde mit Defekten der mitochondrialen Atmung und metabolischer Reprogrammierung in Verbindung gebracht – Prozesse, die häufig in der Krebsbiologie sowie in Mechanismen kardiometabolischer Erkrankungen eine Rolle spielen. Daher wird PTPMT1 in Signalwegen untersucht, die mitochondriale Lipidsignalgebung mit oxidativer Phosphorylierung, Mitophagie und Stressantworten verknüpfen.

PTPMT1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PTPMT1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PTPMT1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PTPMT1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PTPMT1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PTPMT1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PTPMT1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PTPMT1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PTPMT1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PTPMT1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.