PTPε CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405606
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PTPε Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PTPε-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PTPε: sc-515692
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PTPε CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-405606 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
PTPRE kodiert die Protein-Tyrosinphosphatase Epsilon (PTPε), eine rezeptortypische und zytosolische Phosphatase, die Signalwege moduliert, indem sie Phosphotyrosinreste auf zentralen Kinase-Substraten dephosphoryliert. PTPε ist an der Kontrolle des Outputs der MAPK- und JAK/STAT-Signalwege beteiligt und kann die Signalübertragung von Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie Src-Familien-Kinasen feinabstimmen, wodurch Zellproliferation, Adhäsion, Migration und Aktivierungsschwellen von Immunzellen beeinflusst werden. Indem PTPε phosphorylierungsabhängige Signalnetzwerke formt, wird es in Zusammenhängen fehlregulierter Wachstumsfaktor- und Entzündungssignale sowie der onkogenen Umverdrahtung von Signalwegen untersucht. Seine isoformspezifische Lokalisation und Aktivität machen PTPRE zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die kompartimentalisierte Kontrolle zellulärer Signalgebung durch Phosphatasen zu untersuchen.
Das PTPε CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PTPRE-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PTPRE-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PTPRE nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PTPε-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PTPRE-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PTPε-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf PTPRE-Exone abzielen, die für die PTPε-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere PTPRE-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PTPε CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PTPε CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PTPRE-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PTPε HDR-Plasmid (h) und PTPε HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PTPRE-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PTPRE-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.