Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PTH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401280
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PTH Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PTH, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PTH Antibody (H-7): sc-398856
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PTH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401280 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
L’ormone paratiroideo (PTH) è un peptide endocrino prodotto principalmente dalle cellule principali delle paratiroidi, che mantiene l’omeostasi sistemica di calcio e fosfato agendo su rene e osso. Legandosi a PTH1R, il PTH attiva le vie di segnalazione Gs/cAMP/PKA e Gq/PLC, modulando l’accoppiamento osteoblasto–osteoclasto e la gestione tubulare renale di calcio e fosfato, inclusa la regolazione dell’attivazione della vitamina D. La segnalazione indotta dal PTH si interfaccia con reti del metabolismo minerale come le vie FGF23–Klotho e influenza programmi trascrizionali a valle in diversi tipi cellulari scheletrici e renali. Un’espressione o una segnalazione del PTH deregolata è associata a disturbi dell’equilibrio degli ioni minerali e del rimodellamento osseo, offrendo un utile punto di accesso per studi meccanicistici in modelli di endocrinologia, biologia scheletrica e nefrologia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PTH (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PTH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PTH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PTH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PTH.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PTH per lo studio della segnalazione di PTH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PTH critici per la funzione di PTH
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PTH per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PTH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PTH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PTH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PTH Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PTH (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PTH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PTH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.