Plásmido Doble Nickase (m) PTEN: sc-422475-NIC

El gen **Pten** de ratón codifica **PTEN**, una fosfatasa de lípidos y proteínas que antagoniza la señalización de **PI3K** al desfosforilar **PIP3** a **PIP2**, limitando así la actividad de la vía **AKT/mTOR**. A través de esta función, PTEN regula el crecimiento, la supervivencia, la proliferación, la migración y la homeostasis metabólica celulares, y también influye en la estabilidad del genoma y en las respuestas al daño del ADN. La alteración de la señalización dependiente de PTEN se utiliza ampliamente para modelar la desregulación de la señalización por factores de crecimiento y los programas alterados de diferenciación celular en sistemas de mamíferos. En biología del ratón, **Pten** se estudia con frecuencia en contextos como el desarrollo tisular, la regulación inmunitaria y la función neuronal, donde la magnitud de la señalización **PI3K–AKT** es un determinante clave del fenotipo.

PTEN El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pten en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pten. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pten. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pten alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.