Plasmide CRISPR d'Activation (m) PSS1: sc-422474-ACT

Le gène murin *Ptdss1* code la phosphatidylsérine synthase 1 (PSS1), une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse la biosynthèse de la phosphatidylsérine via des réactions d’échange de base, contribuant ainsi à façonner le paysage phospholipidique cellulaire. La phosphatidylsérine favorise la courbure membranaire et le fonctionnement des sites de contact entre organites, et sa distribution asymétrique contribue au trafic vésiculaire, à la signalisation apoptotique et à la reconnaissance immunitaire des cellules mourantes. Par son rôle dans l’homéostasie lipidique, PSS1 influence la fonction mitochondriale, l’autophagie et des réseaux plus larges de signalisation lipidique en interface avec les réponses au stress et le remodelage métabolique. Des dérégulations du métabolisme de la phosphatidylsérine ont été associées à des phénotypes neurologiques et métaboliques, faisant de *Ptdss1* un nœud utile pour disséquer des mécanismes lipido-dépendants dans des modèles pertinents pour l’étude des maladies.

PSS1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ptdss1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSS1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ptdss1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ptdss1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ptdss1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ptdss1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.