PSMD1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405171-ACT

PSMD1 kodiert eine nicht-ATPase-Untereinheit des 19S-Regulatorpartikels des 26S-Proteasoms, einer zentralen Maschinerie für den ATP-abhängigen Abbau polyubiquitinierter Proteine. Durch seinen Beitrag zur Substraterkennung und zum Aufbau des Proteasoms unterstützt PSMD1 die Proteinhomöostase, den Zellzyklusverlauf, DNA-Schadensantworten sowie stressadaptive Signalwege über das Ubiquitin-Proteasom-System. Regulatorische Proteasom-Untereinheiten beeinflussen den Umsatz wichtiger Signalwegmediatoren, darunter Komponenten der NF-κB-Signalübertragung und anderer Transkriptionsprogramme, und verknüpfen die PSMD1-Aktivität damit mit entzündlichen und proliferativen Zuständen. Eine dysregulierte Proteasomfunktion und eine veränderte Expression von Proteasom-Untereinheiten werden häufig mit onkogenen Phänotypen, proteotoxischem Stress und für Neurodegeneration relevanten Defekten der Proteinhomöostase in Verbindung gebracht.

PSMD1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PSMD1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PSMD1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PSMD1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PSMD1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PSMD1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PSMD1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PSMD1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PSMD1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PSMD1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.