Plasmide Double Nickase (h) PSGL-1: sc-401534-NIC

SELPLG code pour le ligand glycoprotéique de la P‑sélectine 1 (PSGL‑1), une glycoprotéine de surface cellulaire de type mucine, sialylée et fucosylée, exprimée sur la plupart des leucocytes, qui assure l’accrochage initial et le roulement sur l’endothélium activé via sa liaison aux P‑, E‑ et L‑sélectines. Par son rôle dans l’adhésion dépendante des sélectines, PSGL‑1 coordonne les étapes précoces du recrutement leucocytaire, de la transmigration et du trafic des cellules inflammatoires, en s’intégrant à la signalisation des chimiokines et à l’activation des intégrines pour stabiliser les interactions leucocyte–endothélium. PSGL‑1 participe également au dialogue leucocyte–plaquette et peut influencer des programmes d’activation immunitaire en aval en modulant des signalisations dépendantes du contact cellulaire. Une biologie PSGL‑1–sélectines dérégulée est impliquée dans les maladies inflammatoires chroniques, l’inflammation vasculaire, le recrutement leucocytaire associé à la thrombose et, dans des contextes de recherche, la métastase associée au cancer, ce qui fait de SELPLG une cible utile pour des études mécanistiques de l’adhésion et de la régulation immunitaire.

PSGL-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SELPLG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SELPLG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SELPLG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SELPLG.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.