PSF CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402024-ACT

Humanes **SFPQ** kodiert das **PSF-Protein**, einen multifunktionalen nukleären RNA- und DNA-bindenden Faktor, der Transkriptionsregulation, prä‑mRNA‑Spleißen und die 3′‑Endverarbeitung von RNA koordiniert. PSF ist über Interaktionen mit langen nichtkodierenden RNAs und RNA-bindenden Partnern an der Dynamik von Paraspeckles und nukleären Körperchen beteiligt und prägt so Genexpressionsprogramme unter Stress- und Differenzierungssignalen. Es trägt zudem zur Genomstabilität bei, indem es die Signalwege der DNA-Schadensantwort und die Wahl von Reparaturwegen beeinflusst und damit RNA-Prozessierung mit chromatinassoziierten Vorgängen verknüpft. Eine Fehlregulation von SFPQ/PSF-assoziierten Ribonukleoproteinkomplexen wurde in Zusammenhängen beschrieben, in denen eine veränderte Spleißgenauigkeit, genomische Instabilität und abweichende transkriptionelle Kontrolle eine Rolle spielen—Themen, die häufig in der Krebs- und Neurodegenerationsforschung untersucht werden.

PSF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SFPQ-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PSF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SFPQ-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SFPQ-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PSF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SFPQ-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PSF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PSF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SFPQ-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.