Plásmido CRISPR de Activación (h) PSF: sc-402024-ACT

El SFPQ humano codifica la proteína PSF, un factor nuclear multifuncional de unión a ARN y ADN que coordina la regulación de la transcripción, el empalme del pre-ARNm y el procesamiento del extremo 3′ del ARN. PSF participa en la dinámica de los paraspeckles y de los cuerpos nucleares mediante interacciones con ARN largos no codificantes y socios de unión a ARN, moldeando programas de expresión génica ante señales de estrés y diferenciación. También contribuye al mantenimiento del genoma al influir en la señalización de la respuesta al daño del ADN y en la elección de vías de reparación, vinculando el procesamiento de ARN con transacciones asociadas a la cromatina. Se ha reportado la desregulación de complejos ribonucleoproteicos asociados a SFPQ/PSF en contextos que implican una fidelidad de empalme alterada, inestabilidad genómica y un control transcripcional aberrante, aspectos que se exploran con frecuencia en la investigación sobre cáncer y neurodegeneración.

PSF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SFPQ sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PSF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SFPQ en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SFPQ, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PSF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SFPQ y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PSF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PSF en células tumorales con expresión de SFPQ silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.