PRR14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-433320

Übersicht

Prr14 kodiert PRR14, ein prolinreiches nukleäres Protein, das über Wechselwirkungen mit der Kernlamina und dem Chromatin an der Organisation der nukleären Architektur beteiligt ist. PRR14 trägt dazu bei, Heterochromatin an die Kernperipherie zu verankern, und beeinflusst dadurch den epigenetischen Zustand, die Genomstabilität sowie zellzyklusabhängige Veränderungen der Kernorganisation. Eine veränderte Regulation der Kontakte zwischen Kernlamina und Chromatin wurde mit Störungen von Differenzierungsprogrammen und aberranten proliferativen Signalsystemen in Verbindung gebracht, was PRR14 zu einem nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung der kernhüllenabhängigen Genregulation macht. In Mausmodellen kann eine Perturbation von Prr14 dazu beitragen zu klären, wie die räumliche Genomorganisation mit der Transkriptionskontrolle und stressresponsiven Signalwegen zusammenwirkt.

Das PRR14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Prr14-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Prr14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Prr14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PRR14-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Prr14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PRR14-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Prr14-Exone abzielen, die für die PRR14-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Prr14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PRR14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PRR14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Prr14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PRR14 HDR-Plasmid (m) und PRR14 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Prr14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Prr14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.