Plasmide CRISPR/Cas9 KO Protein S (h): sc-401491

Présentation

PROS1 code la protéine S, une glycoprotéine dépendante de la vitamine K qui agit comme cofacteur anticoagulant majeur de la protéine C activée, en favorisant l’inactivation protéolytique des facteurs Va et VIIIa et en limitant la génération de thrombine. Au-delà de son rôle dans la cascade de coagulation, la protéine S sert également de ligand des récepteurs tyrosine kinases de la famille TAM (TYRO3, AXL, MERTK), soutenant l’efférocytose dépendante de la phosphatidylsérine et la modulation de la signalisation immunitaire innée. Par ces voies, PROS1 fait le lien entre l’hémostase, l’homéostasie inflammatoire et l’élimination des cellules apoptotiques. Un déficit génétique ou une activité réduite de la protéine S est associé à une coagulation dérégulée et à une prédisposition thrombotique, et des altérations de la signalisation TAM ont été reliées à une dérégulation immunitaire ainsi qu’à des phénotypes du microenvironnement associés au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Protein S (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PROS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PROS1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PROS1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Protein S.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PROS1 pour l'étude de la signalisation de Protein S, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PROS1 essentiels à la fonction de Protein S
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PROS1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Protein S plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Protein S plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PROS1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Protein S plasmide HDR (h) et le Protein S (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PROS1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PROS1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.