PRL-R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400814-ACT

PRLR kodiert den menschlichen Prolaktinrezeptor (PRL‑R), einen Typ‑I‑Zytokinrezeptor, der die Prolaktin‑Signalübertragung vermittelt und damit die epitheliale Differenzierung, die Expression laktogener Gene und die Gewebehomöostase reguliert. Die ligandenabhängige Dimerisierung des Rezeptors aktiviert JAK2/STAT5 sowie die PI3K‑AKT‑ und MAPK/ERK‑Signalwege und verknüpft so transkriptionelle Programme und Überlebenssignale in endokrin ansprechenden Zelltypen. Eine Fehlregulation der PRL‑R‑Signalgebung wurde in mehreren Geweben mit veränderter Proliferation, Differenzierung und inflammatorischem Crosstalk in Verbindung gebracht, wodurch PRLR ein intensiv untersuchter Knotenpunkt in der hormongetriebenen Biologie ist. PRLR‑Expression und Signalwegaktivität werden häufig in Modellen der Brust‑ und Prostatabiologie, der metabolischen Regulation und der Immunmodulation untersucht, um kontextspezifische Abhängigkeiten der Signalgebung zu klären.

PRL-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PRLR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRL-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PRLR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PRLR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRL-R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PRLR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRL-R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRL-R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PRLR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.