PP5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405979-ACT

PPP5C kodiert die Serin/Threonin-Proteinphosphatase 5 (PP5), eine TPR-Domänen-Phosphatase, die Signalübertragung durch ihre Assoziation mit HSP90-Chaperon-Komplexen und zahlreichen Client-Proteinen integriert. PP5 reguliert die phosphorylierungsabhängige Kontrolle von Stressantworten, Zellzyklusprogression und DNA-Schadenssignalgebung, einschließlich der Modulation von Signalwegen, die mit der ATM/ATR-Signalgebung und MAPK-Netzwerken verknüpft sind. Durch die Dephosphorylierung zentraler Regulatoren beeinflusst PPP5C die Funktion des Glukokortikoidrezeptors, die Checkpoint-Kontrolle und die Proteostase und stellt damit einen geeigneten Knotenpunkt dar, um die Genauigkeit der Signaltransduktion zu untersuchen. Eine dysregulierte PPP5C-Aktivität oder -Expression wurde mit veränderten Proliferations- und Stresstoleranz-Phänotypen in Krebs- und neurobiologischen Kontexten in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Krankheitsmodelle untermauert.

PP5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PPP5C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PP5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PPP5C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PPP5C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PP5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PPP5C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PP5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PP5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PPP5C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.