Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422382
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PP2A-Cβ Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PP2A-Cβ-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PP2A-Cα/β: sc-80665
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422382 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Ppp2cb kodiert die katalytische Cβ‑Untereinheit der Proteinphosphatase 2A (PP2A), einer wichtigen Serin/Threonin‑Phosphatase, die die Kinase‑Signalgebung ausbalanciert, indem sie vielfältige Substrate im Zytoplasma und im Zellkern dephosphoryliert. Holoenzyme mit PP2A‑Cβ regulieren den Zellzyklus, DNA‑Schadensantworten, Apoptose und die metabolische Kontrolle über Signalwege, zu denen unter anderem PI3K–AKT, MAPK/ERK und Wnt/β‑Catenin gehören. In Mausmodellen beeinflusst eine Störung der PP2A‑Aktivität die Phosphorylierungs‑Homöostase und kann Signalnetzwerke umgestalten, die häufig an onkogener Transformation und neurobiologischen Funktionsstörungen beteiligt sind. Ppp2cb ist daher ein nützlicher Knotenpunkt, um die phosphataseabhängige Kontrolle von Wachstum, Stressanpassung und neuronaler Signalgebung zu untersuchen.
Das PP2A-Cβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppp2cb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppp2cb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppp2cb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PP2A-Cβ-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppp2cb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PP2A-Cβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Ppp2cb-Exone abzielen, die für die PP2A-Cβ-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppp2cb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PP2A-Cβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PP2A-Cβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppp2cb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PP2A-Cβ HDR-Plasmid (m) und PP2A-Cβ HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppp2cb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppp2cb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.