PP1γ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401476-ACT

PPP1CC kodiert die Proteinphosphatase 1 Gamma (PP1γ), eine katalytische Serin/Threonin-Phosphatase, die mit unterschiedlichen regulatorischen Untereinheiten zusammenwirkt, um Substratspezifität und subzelluläre Lokalisation zu steuern. PP1γ ist an zentralen phosphorylierungsabhängigen Signalwegen beteiligt, die über die Dephosphorylierung wichtiger Signal- und Strukturproteine den Zellzyklusverlauf, den Austritt aus der Mitose, DNA-Schadensantworten, die Organisation des Zytoskeletts und die RNA-Prozessierung regulieren. Durch die Feinabstimmung des Kinase-Phosphatase-Gleichgewichts beeinflusst PPP1CC die Chromatindynamik und Transkriptionsprogramme, die Proliferation und Differenzierung prägen. Veränderte PP1-Signalisierung und PPP1CC-assoziierte regulatorische Netzwerke wurden mit einer gestörten Wachstumskontrolle und Phänotypen der Genomstabilität in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und andere proliferative Erkrankungen relevant sind.

PP1γ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PPP1CC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PP1γ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PPP1CC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PPP1CC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PP1γ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PPP1CC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PP1γ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PP1γ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PPP1CC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.