PP1β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422378

Übersicht

Ppp1cb kodiert die Proteinphosphatase 1 Beta (PP1β), eine katalytische Untereinheit der Serin/Threonin-Proteinphosphatase 1, die die Kinase-Signalgebung ausgleicht, indem sie in einem kontextabhängigen manner vielfältige Substrate dephosphoryliert. PP1β ist an der Regulation des Zellzyklus-Fortschritts, der Zytoskelettdynamik und der Stoffwechselkontrolle beteiligt, indem sie als Holoenzym zusammen mit Targeting- und inhibitorischen Untereinheiten assembliert, die die subzelluläre Lokalisation und Substratspezifität steuern. In Mausmodellen wird die PP1β-assoziierte Phosphoregulation häufig in Signalwegen untersucht, die die Chromatinorganisation, den Austritt aus der Mitose und stressresponsive Signalgebung kontrollieren. Eine fehlregulierte PP1-Aktivität und veränderte PP1β-haltige Komplexe werden oft im Hinblick auf ihre Rollen bei aberranter Proliferation, neurobiologischen Prozessen und kardiometabolischen Phänotypen als mechanistische Korrelate in Krankheitsmodellen erforscht.

Das PP1β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppp1cb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppp1cb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppp1cb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PP1β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppp1cb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PP1β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ppp1cb-Exone abzielen, die für die PP1β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppp1cb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PP1β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PP1β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppp1cb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PP1β HDR-Plasmid (m) und PP1β HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppp1cb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppp1cb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.