PP1α Plasmide Double Nickase (h): sc-400318-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PP1α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PP1α Double Nickase Plasmid (h) e il PP1α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PPP1CA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PP1 Antibody (E-9): sc-7482
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PP1α Plasmide Double Nickase (h) | sc-400318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PP1α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP1CA codifica l’isoforma alfa della subunità catalitica della proteina fosfatasi 1 (PP1α), una delle principali fosfatasi Ser/Thr che annulla eventi di fosforilazione in un’ampia gamma di programmi cellulari. L’attività di PP1α è indirizzata da subunità regolatorie per controllare il metabolismo del glicogeno, la progressione del ciclo cellulare, la dinamica della cromatina e l’organizzazione del citoscheletro, controbilanciando la segnalazione guidata dalle chinasi. Attraverso la defosforilazione di substrati chiave, PPP1CA contribuisce a coordinare le risposte al danno al DNA, l’uscita dalla mitosi e la regolazione della trascrizione. Una segnalazione di PP1 disregolata e interazioni fosfatasi–regolatore alterate sono state collegate a proliferazione anomala e a segnali di stress osservati in molteplici stati cellulari associati a malattia, supportandone lo studio in modelli meccanicistici incentrati su specifici pathway.
PP1α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PPP1CA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PPP1CA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PPP1CA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PPP1CA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.