PON1CRISPR激活质粒(h): sc-402701-ACT

人源 PON1（对氧磷酶 1）是一种钙依赖性的酯酶/内酯酶，在血浆中主要与 HDL 结合，可参与有机磷化合物的解毒以及氧化脂质的水解。PON1 通过限制脂质过氧化产物并修饰具有生物活性的内酯，与氧化应激反应、脂蛋白重塑以及与血管稳态相关的炎症信号通路发生交叉。PON1 的表达水平与酶活性的差异与心代谢风险、动脉粥样硬化过程以及对外源化学物暴露的易感性相关，且常与其他抗氧化与脂质处理通路一并研究。这些特性使 PON1 成为在人类细胞模型中研究 HDL 功能、氧化还原生物学以及基因—环境互作机制的有用靶点。

PON1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PON1的表达。

PON1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PON1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PON1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PON1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PON1位点，并能够研究内源性位点上依赖于PON1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PON1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PON1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。