POL H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-401794-KO-2

Übersicht

POLH kodiert die DNA-Polymerase Eta (Pol η), eine Translesions-Synthese-Polymerase (TLS) der Y-Familie, die während der DNA-Replikation die präzise Umgehung UV-induzierter Cyclobutan-Pyrimidin-Dimere ermöglicht. Sie wirkt in der DNA-Schadentoleranz und in Reaktionen auf Replikationsstress und koordiniert dabei mit dem proliferierenden Zellkernantigen (PCNA) sowie einem ubiquitinabhängigen Wechsel von replizierenden Polymerasen zu spezialisierten TLS-Polymerasen. Der Verlust oder eine Funktionsstörung von Pol η beeinträchtigt die Genomstabilität und erhöht die UV-Mutagenese, was POLH mit der Xeroderma-pigmentosum-Variante (XP‑V) und allgemeineren Mechanismen der Karzinogenese durch Defekte in der DNA-Reparatur verbindet. Da POLH an der Schnittstelle zwischen der mit der Nukleotid-Exzisionsreparatur verbundenen Verarbeitung von Läsionen und der Anpassung des S‑Phasen-Checkpoints steht, wird es häufig in Signalwegen untersucht, die Mutationssignaturen und die Dynamik von Replikationsgabeln steuern.

Das POL H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POLH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POLH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POLH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die POL H-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POLH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der POL H-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf POLH-Exone abzielen, die für die POL H-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere POLH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom POL H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom POL H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POLH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das POL H HDR-Plasmid (h) und POL H HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POLH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POLH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.