POL H CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-401794-KO-2

概要

POLHはDNAポリメラーゼη（Pol η）をコードしており、これはYファミリーに属する損傷乗り越え合成（TLS）ポリメラーゼで、DNA複製中にUVによって生じるシクロブタン型ピリミジンダイマーを正確にバイパスすることを可能にします。Pol ηはDNA損傷耐性および複製ストレス応答の中で機能し、増殖細胞核抗原（PCNA）と協調するとともに、ユビキチン依存的な切り替えによって、複製ポリメラーゼから特殊化したTLSポリメラーゼへの移行を制御します。Pol ηの欠失または機能不全はゲノム安定性を損ない、UV変異誘発を増加させるため、POLHは色素性乾皮症バリアント（XP-V）や、DNA修復欠損によって駆動されるより広範な発がん機構と関連づけられています。さらにPOLHは、ヌクレオチド除去修復に関連する損傷処理とS期チェックポイント適応の接点に位置することから、変異シグネチャーや複製フォーク動態を制御する経路の研究でしばしば取り上げられます。

POL H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるPOLH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、POLH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、POLHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、POL Hタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、POL Hシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、POLH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• POL Hの機能に不可欠なPOLHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、POLHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• POL H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPOL H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、POLH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  POL H HDRプラスミド（h）および POL H HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPOLHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPOLH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。