Podocin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400930

Übersicht

NPHS2 kodiert Podocin, ein essenzielles Schlitzdiaphragma-Protein in humanen Podozyten, das Signalkomplexe an der glomerulären Filtrationsbarriere organisiert. Podocin interagiert mit Nephrin und CD2AP und trägt zur Organisation von Lipid-Raft-Mikrodomänen bei; dadurch werden Zytoskelettdynamik, Mechanosensorik und die Aufrechterhaltung der Fußfortsatz-Architektur unterstützt. Eine Störung von NPHS2 beeinträchtigt die Integrität des Schlitzdiaphragmas und verändert podozytäre Signalwege, die mit Aktin-Remodeling und Zellüberleben verknüpft sind. Genetische und funktionelle Defekte von Podocin sind stark mit proteinurischen Nierenerkrankungen assoziiert, darunter steroidresistentes nephrotisches Syndrom und fokal-segmentale Glomerulosklerose, wodurch NPHS2 ein zentrales Ziel für die Modellierung von Funktionsstörungen der glomerulären Barriere ist.

Das Podocin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NPHS2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NPHS2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NPHS2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Podocin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NPHS2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Podocin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NPHS2-Exone abzielen, die für die Podocin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NPHS2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Podocin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Podocin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NPHS2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Podocin HDR-Plasmid (h) und Podocin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NPHS2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NPHS2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.