PNPase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404406

Übersicht

PNPT1 kodiert die Polyribonukleotid-Nukleotidyltransferase 1 (PNPase), ein mitochondriales RNA-Prozessierungsenzym, das an der 3′–5′-Exoribonukleaseaktivität und der RNA-Überwachung im Intermembranraum beteiligt ist. PNPase trägt zur mitochondrialen Genexpression bei, indem sie den Import und Umsatz kleiner RNAs reguliert und die Funktion des Mitoribosoms mitprägt; dadurch beeinflusst sie die Kapazität der oxidativen Phosphorylierung und die zelluläre Bioenergetik. Störungen von PNPT1 wurden mit Phänotypen einer mitochondrialen Dysfunktion in Verbindung gebracht, darunter Defekte der Atmungskettenaktivität und veränderte Stressantworten, die mit einem beeinträchtigten mitochondrialen RNA-Stoffwechsel zusammenhängen. Daher wird PNPT1 häufig in Signalwegen untersucht, die mitochondriale RNA-Homöostase, durch aberrante RNA-Spezies ausgelöste angeborene Immun-Signalgebung sowie für neuroentwicklungs- und stoffwechselrelevante Krankheitsmechanismen bedeutsame Prozesse miteinander verknüpfen.

Das PNPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PNPT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PNPT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PNPT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PNPase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PNPT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PNPase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PNPT1-Exone abzielen, die für die PNPase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PNPT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PNPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PNPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PNPT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PNPase HDR-Plasmid (h) und PNPase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PNPT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PNPT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.