PMM2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406428

Übersicht

PMM2 kodiert die Phosphomannomutase 2, ein zytosolisches Enzym, das Mannose-6-phosphat und Mannose-1-phosphat ineinander umwandelt, um die GDP-Mannose-Produktion und die N‑verknüpfte Glykosylierung zu unterstützen. Über seine Rolle in der Biosynthese von Glykanvorstufen beeinflusst PMM2 in zahlreichen Zelltypen die Proteinfaltung, Qualitätskontrolle, Sekretion und Interaktionen mit der extrazellulären Matrix. Eine verringerte PMM2-Aktivität ist mit kongenitalen Störungen der Glykosylierung (CDG) assoziiert, bei denen eine beeinträchtigte Reifung von Glykoproteinen Signalgebung, Transportprozesse und die Organentwicklung stört. In zellbasierten Modellen wird die PMM2-Funktion häufig untersucht, um glykosylierungsabhängige Proteostase- und Stressantwortwege, einschließlich der ER‑Homöostase, zu analysieren.

Das PMM2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PMM2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PMM2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PMM2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PMM2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PMM2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PMM2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PMM2-Exone abzielen, die für die PMM2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PMM2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PMM2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PMM2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PMM2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PMM2 HDR-Plasmid (h) und PMM2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PMM2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PMM2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.