PLIC-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404783-ACT

O gene humano **UBQLN2** codifica a proteína semelhante à ubiquitina **PLIC-2**, um recetor e adaptador de ubiquitina que acopla substratos poliubiquitinados ao proteassoma 26S para manter a proteostase. A PLIC-2 participa no controlo de qualidade proteico dependente de ubiquitina, na degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD) e no turnover de proteínas mal dobradas ou propensas à agregação, ligando-a a respostas ao stresse celular e ao crosstalk entre autofagia e proteassoma. A desregulação da função de UBQLN2 tem sido associada à agregação proteica aberrante e ao comprometimento de vias de depuração relevantes para mecanismos de doenças neurodegenerativas, incluindo ELA e patologia do espectro da demência frontotemporal. Como um nó na sinalização ubiquitina–proteassoma, o UBQLN2 é frequentemente estudado pelos seus papéis na homeostase neuronal, na formação de inclusões citoplasmáticas e na modulação de vias de stresse proteotóxico.

PLIC-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UBQLN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PLIC-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UBQLN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UBQLN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PLIC-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UBQLN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PLIC-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PLIC-2 em células tumorais com expressão de UBQLN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.