PLAC8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405093-ACT

PLAC8 (placenta associated 8) codifica una piccola proteina ricca di cisteina implicata nella regolazione della differenziazione cellulare, della plasticità epitelio‑mesenchimale e della segnalazione legata all’immunità innata. Nelle cellule umane, PLAC8 è stato associato alla modulazione di programmi proliferativi e di risposta allo stress, includendo vie connesse ad autofagia, omeostasi redox e rimodellamento del citoscheletro. Un’alterata espressione di PLAC8 è stata riportata in molteplici contesti patologici, in particolare nei tumori, dove correla con cambiamenti nell’invasività, in fenotipi associati alla metastasi e nelle interazioni con il microambiente tumorale. Queste caratteristiche rendono PLAC8 un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo trascrizionale, sulle transizioni di stato cellulare e su output di segnalazione dipendenti dal contesto.

PLAC8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PLAC8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PLAC8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PLAC8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PLAC8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PLAC8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PLAC8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PLAC8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PLAC8 nelle cellule tumorali con espressione di PLAC8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.