pki α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422270

Übersicht

Pkia kodiert den Protein‑Kinase‑Inhibitor alpha (PKIα), einen endogenen Pseudosubstrat‑Inhibitor, der an die katalytische Untereinheit der cAMP‑abhängigen Proteinkinase A (PKA) bindet und die Phosphorylierung nachgeschalteter Zielproteine begrenzt. Durch die Modulation der PKA‑Aktivität beeinflusst PKIα cAMP/PKA‑regulierte Prozesse, darunter die transkriptionelle Kontrolle (z. B. CREB‑abhängige Signalwege), den Stoffwechsel, Differenzierung und Stressantworten. PKIα trägt außerdem zur Feinabstimmung des Pathway‑Cross‑Talks mit MAPK‑ und anderen Kinase‑Netzwerken bei, indem es die Phosphorylierungsdynamik verändert. Eine Fehlregulation der cAMP–PKA‑Signalübertragung wurde mit verschiedenen krankheitsrelevanten Mechanismen in Verbindung gebracht, etwa abnormem Zellwachstum, neurobiologischen Phänotypen und Veränderungen der endokrinen Signalgebung, was Pkia zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien in Mausmodellen macht.

Das pki α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pkia-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pkia-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pkia nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die pki α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pkia-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der pki α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pkia-Exone abzielen, die für die pki α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pkia-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom pki α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom pki α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pkia-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das pki α HDR-Plasmid (m) und pki α HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pkia-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pkia-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.