PKC lambda/iota Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422263

Descripción general

Prkci codifica la isoforma atípica de la proteína quinasa C, PKC lambda/iota, una quinasa de serina/treonina que actúa aguas abajo de complejos de polaridad como PAR3–PAR6 y contribuye al establecimiento de la polaridad ápico-basal, la organización de las uniones estrechas y la división celular asimétrica. PKC lambda/iota integra señales reguladas por PI3K y por pequeñas GTPasas para coordinar la remodelación del citoesqueleto, el tráfico vesicular y la morfogénesis epitelial. En modelos murinos, la alteración de la actividad de Prkci se ha asociado con una arquitectura tisular desorganizada y con programas de desarrollo y de células inmunitarias aberrantes, lo que la hace relevante para estudios sobre integridad epitelial, diferenciación y señalización sensible al estrés. Su papel central en las vías de polaridad y control del crecimiento también vincula la desregulación de Prkci con mecanismos que se investigan con frecuencia en biología del cáncer y en contextos de investigación metabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PKC lambda/iota (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prkci en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prkci junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prkci tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PKC lambda/iota.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prkci para la investigación de la señalización de PKC lambda/iota, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Prkci críticos para la función de PKC lambda/iota
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prkci para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PKC lambda/iota CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PKC lambda/iota CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prkci. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PKC lambda/iota (m) y el plásmido HDR PKC lambda/iota (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prkci para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prkci definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.