PKC beta CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422259
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PKC beta Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PKC beta-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PKC beta 1: sc-8049
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PKC beta CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422259 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Prkcb kodiert für die Proteinkinase C beta (PKCβ), eine durch Diacylglycerol und Ca2+ aktivierbare Serin/Threonin-Kinase, die rezeptorabhängige Phospholipase‑C‑Signalübertragung mit Phosphorylierungsprogrammen koppelt, welche Proliferation, Apoptose und Differenzierung steuern. In murinen Immun- und hämatopoetischen Zellen ist PKCβ ein zentraler Effektor nachgeschaltet der B‑Zell‑Rezeptor(BCR)-Signalgebung und prägt die Aktivierung der NF‑κB- und MAPK‑Signalwege sowie Zytoskelett‑Remodelling und vesikulären Transport. PKCβ reguliert zudem Reaktionen von Endothel- und glatten Muskelzellen durch Modulation von Adhäsion, Barrierefunktion und Signalwegen des oxidativen Stresses. Eine veränderte PKCβ‑Aktivität wurde mit fehlregulierter Immunsignalgebung und entzündlichen Prozessen in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien zu kardiometabolischen und vaskulären Phänotypen unterstreicht.
Das PKC beta CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Prkcb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Prkcb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Prkcb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PKC beta-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Prkcb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PKC beta-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Prkcb-Exone abzielen, die für die PKC beta-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Prkcb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PKC beta CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PKC beta CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Prkcb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PKC beta HDR-Plasmid (m) und PKC beta HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Prkcb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Prkcb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.