Plasmide CRISPR/Cas9 KO PiT1 (h): sc-403121

Présentation

SLC20A1 code pour PiT1, un symporteur phosphate/sodium de type III, dépendant du sodium et exprimé de façon ubiquitaire, qui régule l’entrée de phosphate inorganique afin de soutenir la synthèse des nucléotides, la production de phospholipides membranaires et la bioénergétique cellulaire. PiT1 influence des réseaux de signalisation liés à l’homéostasie du phosphate, notamment les voies ERK/MAPK et le contrôle du cycle cellulaire, et est impliqué dans la différenciation ostéogénique et les processus de minéralisation via des programmes transcriptionnels sensibles au phosphate. Une activité altérée de SLC20A1 a été associée à une prolifération dérégulée et à des réponses au stress, et fait souvent l’objet d’études dans le contexte de la calcification vasculaire, du remodelage métabolique et de la biologie tumorale, où la disponibilité en phosphate peut façonner des phénotypes de croissance et de survie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PiT1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC20A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC20A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC20A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PiT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC20A1 pour l'étude de la signalisation de PiT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC20A1 essentiels à la fonction de PiT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC20A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PiT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PiT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC20A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PiT1 plasmide HDR (h) et le PiT1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC20A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC20A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.