Plasmide CRISPR/Cas9 KO PISD (h): sc-404398
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PISD Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PISD, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PISD Antibody (H-2): sc-390070
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PISD (h) | sc-404398 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PISD code la phosphatidylsérine décarboxylase, une enzyme de la membrane interne mitochondriale qui convertit la phosphatidylsérine en phosphatidyléthanolamine, soutenant la biogenèse membranaire, l’architecture des crêtes et l’homéostasie de l’organite. En contrôlant le pool de PE, PISD influence le remodelage lipidique, la dynamique mitochondriale et des processus liés à la phosphorylation oxydative et à l’apoptose. La perturbation du métabolisme des phospholipides dépendant de PISD a été associée à des défauts de fonction mitochondriale et à des réponses plus larges au stress cellulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de phénotypes neuromusculaires et métaboliques. Son rôle central dans la biosynthèse des lipides mitochondriaux recoupe également des voies qui régulent l’autophagie et le trafic lipidique entre le réticulum endoplasmique (RE) et les mitochondries.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PISD (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PISD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PISD, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PISD à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PISD.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PISD pour l'étude de la signalisation de PISD, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PISD essentiels à la fonction de PISD
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PISD pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PISD plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PISD plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PISD. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PISD plasmide HDR (h) et le PISD (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PISD pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PISD définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.