Pinin Lentiviral Activation Particles (h): sc-405373-LAC

PNN kodiert Pinin, ein multifunktionelles Phosphoprotein, das an Desmosomen und in nukleären Speckles angereichert ist. Dort unterstützt es die Adhäsion epithelialer Zellen und koordiniert die Prozessierung von prä-mRNA. Pinin trägt zum alternativen Spleißen und zum mRNA-Export bei, indem es mit Komponenten des Spleißosoms und des Exon-Junction-Komplexes interagiert und so die Integrität von Zellkontakten mit Genexpressionsprogrammen verknüpft. Über diese Funktionen beeinflusst PNN die epitheliale Differenzierung, die Organisation des Zytoskeletts und stressresponsive Transkriptionsnetzwerke. Eine fehlregulierte PNN-Expression oder -Lokalisation wurde mit veränderten Spleißzuständen sowie mit epithelial-mesenchymalen Transition (EMT)-assoziierten Phänotypen in der Krebsbiologie und in Studien zum Gewebe-Remodeling in Verbindung gebracht.

Pinin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PNN-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Pinin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PNN-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Pinin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PNN-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.