Pinin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-405373-KO-2

概要

PNN は、主として核内に局在するタンパク質である pinin をコードしており、デスモソーム関連複合体や、細胞間接着の状態を核内構造へと結び付けるスペックル様ドメインに豊富に存在します。Pinin はスプライシング制御因子やエクソン接合複合体（exon junction complex）の構成要素と相互作用することで pre-mRNA のプロセシングに関与し、上皮のアイデンティティや分化に関連する選択的スプライシング・プログラムに影響を与えます。これらの役割を通じて、PNN は増殖、遊走、ストレス応答を制御する遺伝子の転写および転写後制御に影響します。PNN の発現やスプライシング・ネットワークの破綻は複数の腫瘍文脈で報告されており、上皮—間葉ダイナミクスや RNA プロセシング駆動型の表現型を研究するうえでの有用性を支持しています。

Pinin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるPNN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PNN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PNNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pininタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pininシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PNN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pininの機能に不可欠なPNNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PNNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pinin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPinin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PNN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pinin HDRプラスミド（h）および Pinin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPNNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPNN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。