Pinin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-405373-KO-2

Übersicht

PNN kodiert Pinin, ein überwiegend nukleäres Protein, das in desmosomenassoziierten Komplexen sowie in speckleartigen Domänen angereichert ist, wo es den Status der Zell-Zell-Adhäsion mit der Organisation des Zellkerns verknüpft. Pinin ist an der prä-mRNA-Verarbeitung beteiligt, indem es mit Splicing-Regulatoren und Komponenten des Exon-Junction-Complexes interagiert und dadurch alternative Spleißprogramme beeinflusst, die mit epithelialer Identität und Differenzierung zusammenhängen. Über diese Funktionen wirkt PNN auf die transkriptionelle und posttranskriptionelle Kontrolle von Genen ein, die Proliferation, Migration und Stressantworten steuern. Eine dysregulierte PNN-Expression oder Störungen in den zugehörigen Spleißnetzwerken wurden in mehreren Tumorkontexten beschrieben, was seine Eignung für die Untersuchung epithelial-mesenchymaler Dynamiken und RNA-Prozessierungs-getriebener Phänotypen unterstreicht.

Das Pinin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PNN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PNN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PNN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Pinin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PNN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Pinin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PNN-Exone abzielen, die für die Pinin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PNN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Pinin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Pinin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PNN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Pinin HDR-Plasmid (h) und Pinin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PNN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PNN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.