Plasmide CRISPR/Cas9 KO PILR-α (h): sc-407310

Présentation

PILRA (paired immunoglobulin-like type 2 receptor alpha) code un récepteur inhibiteur de surface cellulaire particulièrement exprimé au sein des populations myéloïdes, où il reconnaît des ligands de type O‑glycane sialylé et transmet des signaux suppressifs via le recrutement, dépendant des ITIM, de phosphatases telles que SHP‑1/2. En atténuant les programmes d’activation associés aux récepteurs Fc et aux TLR, PILR‑α contribue à la régulation des seuils de l’immunité innée, de la production de cytokines et des fonctions effectrices des leucocytes. Cette activité de type « checkpoint » relie PILR‑α aux voies qui gouvernent l’homéostasie inflammatoire, l’activation des cellules présentatrices d’antigène et les mécanismes d’échappement immunitaire. Des modifications de l’expression de PILRA ou de l’engagement de ses ligands ont été impliquées dans la neuroinflammation et la biologie des maladies infectieuses, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la régulation myéloïde dans des microenvironnements tissulaires complexes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PILR-α (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PILRA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PILRA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PILRA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PILR-α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PILRA pour l'étude de la signalisation de PILR-α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PILRA essentiels à la fonction de PILR-α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PILRA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PILR-α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PILR-α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PILRA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PILR-α plasmide HDR (h) et le PILR-α (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PILRA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PILRA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.