PIAS 3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401406-ACT

PIAS3 (Protein Inhibitor of Activated STAT3) ist eine SUMO-E3-Ligase, die transkriptionelle Antworten moduliert, indem sie die SUMOylierung nukleärer Proteine fördert und die DNA-Bindungsaktivität von STAT3 direkt hemmt. Durch die Regulation der JAK/STAT-Signalübertragung und eine umfassendere, SUMO-abhängige Kontrolle der Aktivität von Transkriptionsfaktoren beeinflusst PIAS3 die Ausgänge der Zytokinsignalisierung, die Progression des Zellzyklus und stressresponsive Genprogramme. PIAS3 wird mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die die Immunregulation und onkogene Signalübertragung steuern, in denen veränderte STAT3-Aktivität und SUMOylierungsdynamiken häufig beobachtet werden. Die Untersuchung der PIAS3-Funktion trägt dazu bei zu klären, wie posttranslationale Modifikationen und transkriptionelle Repression Genexpressionszustände in entzündungsassoziierten und proliferativen Kontexten prägen.

PIAS 3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen -Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PIAS 3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des -Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der -Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PIAS 3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native -Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PIAS 3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PIAS 3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem -Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.