PI 3-kinase p85α Double Nickase Plasmid (h): sc-400224-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PI 3-kinase p85α Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PI 3-kinase p85α Double-Nickase-Plasmid (h) und PI 3-kinase p85α Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PIK3R1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PI 3-kinase p85α: sc-1637
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PI 3-kinase p85α Double Nickase Plasmid (h) | sc-400224-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI 3-kinase p85α Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400224-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIK3R1 kodiert die regulatorische Untereinheit p85α der Phosphoinositid-3-Kinase (PI3K) der Klasse IA, einen zentralen Adapter, der die katalytischen p110‑Untereinheiten stabilisiert und zu aktivierten Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie IRS-Proteinen rekrutiert. Durch die Kopplung von Wachstumsfaktor-Signalen an die Bildung von PIP3 steuert PI3K p85α den AKT–mTOR‑Signalweg und verwandte Pfade, die Zellüberleben, Proliferation, Stoffwechsel und die Feedback-Regulation der Insulinsignalübertragung kontrollieren. p85α beeinflusst zudem den Aufbau von Signalkomplexen über SH2‑Domänen-vermittelte Bindung an Phosphotyrosine und trägt zur Wechselwirkung mit MAPK- und anderen Stressantwort-Netzwerken bei. Eine veränderte PIK3R1‑Funktion und Dysregulation des Signalwegs sind mit onkogenen Signalzuständen und metabolischen Phänotypen assoziiert, weshalb es häufig als Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Kontrolle des PI3K‑Signalwegs genutzt wird.
PI 3-kinase p85α Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PIK3R1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PIK3R1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PIK3R1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PIK3R1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.