PGE synthase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402085

Descripción general

PTGES codifica la prostaglandina E sintasa, una enzima terminal clave de la cascada del ácido araquidónico que convierte la prostaglandina H2 derivada de la COX en prostaglandina E2 (PGE2). Al controlar la abundancia de PGE2, PTGES contribuye a la señalización inflamatoria, la sensibilización al dolor, las respuestas febriles y la modulación de la función de las células inmunitarias a través de las vías de los receptores EP y la señalización cAMP/PKA aguas abajo. La actividad de PTGES se entrecruza con programas impulsados por citocinas (por ejemplo, la inducción vinculada a NF-κB) e influye en procesos como la regulación del tono vascular y las respuestas de la barrera epitelial. La biosíntesis desregulada de PGE2 y la expresión de PTGES se han asociado con la inflamación crónica y la señalización del microambiente tumoral, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos de fisiopatología ligada a la inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PGE synthase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PTGES en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PTGES junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PTGES tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PGE synthase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PTGES para la investigación de la señalización de PGE synthase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PTGES críticos para la función de PGE synthase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PTGES para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PGE synthase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PGE synthase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PTGES. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PGE synthase (h) y el plásmido HDR PGE synthase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PTGES para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PTGES definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.