Plasmide CRISPR d'Activation (h) PGE synthase: sc-402085-ACT

PTGES code la microsomal prostaglandin E synthase-1 (mPGES-1), une enzyme terminale inductible de la cascade de l’acide arachidonique qui convertit la PGH2 issue des COX en prostaglandine E2 (PGE2). Cette activité relie les signaux inflammatoires à la production de médiateurs lipidiques bioactifs et contribue à la modulation de la signalisation des cytokines, du tonus vasculaire, de la sensibilisation à la douleur et de la fonction des cellules immunitaires. PTGES est régulée en aval des voies NF-κB et MAPK et agit de concert avec les enzymes PTGS1/2 et PLA2 pour façonner la production d’eicosanoïdes. Une altération de la signalisation PTGES/PGE2 a été associée à des états inflammatoires chroniques et à des programmes du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible fréquente pour les études mécanistiques de la biologie liée à l’inflammation.

PGE synthase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTGES sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PGE synthase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTGES dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTGES, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PGE synthase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTGES natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PGE synthase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PGE synthase dans les cellules tumorales présentant une expression de PTGES silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.