Plasmide CRISPR d'Activation (h) PGDH: sc-402622-ACT

Le gène humain **HPGD** code la **15‑hydroxyprostaglandine déshydrogénase** (PGDH), l’enzyme limitante responsable de l’oxydation et de l’inactivation, dépendantes du **NAD+**, de prostaglandines bioactives telles que la **PGE2**. En contrôlant le renouvellement des prostanoïdes, la PGDH module les sorties de signalisation **prostaglandines/COX** qui influencent l’inflammation, l’homéostasie épithéliale, les signaux angiogéniques et le remodelage tissulaire. Une activité altérée de **HPGD** modifie l’équilibre local des eicosanoïdes et est fréquemment étudiée dans des contextes où une dérégulation du métabolisme des prostaglandines contribue à des signalisations immunitaires aberrantes et à des phénotypes prolifératifs. En tant que gardien du catabolisme des prostaglandines, **HPGD** constitue un nœud utile pour disséquer la diaphonie entre médiateurs inflammatoires, état métabolique et programmes transcriptionnels.

PGDH Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HPGD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PGDH Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HPGD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HPGD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PGDH. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HPGD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PGDH au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PGDH dans les cellules tumorales présentant une expression de HPGD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.