Plásmido CRISPR de Activación (h) Peroxin 14: sc-405075-ACT

PEX14 codifica la peroxina 14, un componente esencial de la maquinaria de importación peroxisomal que ancla los complejos receptores PEX5/PEX7 en la membrana del peroxisoma para permitir la translocación de enzimas de la matriz. A través de su función en la biogénesis del peroxisoma y la importación de proteínas, PEX14 contribuye a la β‑oxidación de ácidos grasos, la síntesis de lípidos éter y la detoxificación de especies reactivas de oxígeno, lo que lo vincula con el equilibrio redox celular y la homeostasis lipídica. Las alteraciones en la importación y la biogénesis peroxisomal se asocian con trastornos de biogénesis peroxisomal y con fenotipos metabólicos y del neurodesarrollo más amplios, lo que hace que la regulación de PEX14 sea relevante para estudios mecanísticos de la disfunción de orgánulos. En modelos celulares humanos, la modulación de PEX14 ofrece un punto de entrada manejable para investigar vías dependientes del peroxisoma y su interacción con la señalización mitocondrial e inflamatoria.

Peroxin 14 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PEX14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Peroxin 14 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PEX14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PEX14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Peroxin 14. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PEX14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Peroxin 14 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Peroxin 14 en células tumorales con expresión de PEX14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.