Plásmido CRISPR de Activación (h) Per3: sc-411220-ACT

El PER3 humano codifica el componente del reloj circadiano Per3, un regulador con dominio PAS que ayuda a coordinar los bucles de retroalimentación transcripcional–traduccional que controlan los ritmos de 24 horas. PER3 interactúa con la maquinaria central del reloj (incluidos los complejos PER/CRY y la transcripción impulsada por CLOCK:BMAL1) para modular programas rítmicos de expresión génica que afectan la temporización del ciclo celular, el metabolismo, la señalización hormonal y la fisiología neuronal. La alteración de la función o la expresión de PER3 se asocia con fenotipos de desalineación circadiana, como variaciones en el horario de sueño–vigilia, y se ha estudiado en contextos en los que la disrupción del reloj se correlaciona con rasgos neuropsiquiátricos y riesgo cardiometabólico. Por lo tanto, PER3 es una diana útil para analizar la regulación de las vías circadianas, los mecanismos de reajuste de fase y los transcriptomas oscilatorios descendentes en modelos celulares humanos.

Per3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PER3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Per3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PER3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PER3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Per3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PER3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Per3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Per3 en células tumorales con expresión de PER3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.