Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PEPT1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401259-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PEPT1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PEPT1 Double-Nickase-Plasmid (h) und PEPT1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC15A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PEPT1: sc-373742
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PEPT1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401259-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PEPT1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401259-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC15A1 kodiert PEPT1, einen protonengekoppelten Oligopeptidtransporter, der die Aufnahme von Di- und Tripeptiden sowie peptidähnlichen Xenobiotika über die apikale Membran epithelialer Zellen vermittelt, insbesondere im Dünndarm. PEPT1 unterstützt die Nährstoffresorption und die zelluläre Stickstoffhomöostase, indem er den Substrattransport an den transmembranen H\+-Gradienten koppelt und so in die Aminosäurenutzung und epitheliale Stoffwechselprogramme eingebunden ist. Seine Aktivität beeinflusst die Physiologie der intestinalen Barriere und die epitheliale Differenzierung; zudem wurde in entzündlichen und metabolischen Zusammenhängen, die die durch Transporter regulierte Nährstoffverwertung betreffen, eine veränderte SLC15A1-Expression beschrieben. Da PEPT1 auch peptidmimetische Verbindungen transportiert, dient SLC15A1 als Modell zur Untersuchung der Regulation von Solute-Carrier-Transportern, der Kinetik des Membrantransports und epithelialer Stressantworten.
PEPT1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC15A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC15A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC15A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC15A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.