PEPT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401259

Übersicht

SLC15A1 kodiert PEPT1, einen apikalen, protonengekoppelten Oligopeptid-Transporter, der die Aufnahme von Nahrungs-Di- und -Tripeptiden sowie eines breiten Spektrums peptidähnlicher Substrate über epitheliale Barrieren vermittelt. Die PEPT1-Aktivität verknüpft transmembranäre H\+-Gradienten mit der Nährstoffabsorption und verbindet so den intestinalen Transport mit der zellulären Verfügbarkeit von Aminosäuren sowie nachgeschalteten Stoffwechsel- und Stressantwortprozessen. Die Expression ist im Dünndarm am höchsten und kann in anderen Epithelien unter entzündlichen oder metabolischen Störungen induziert werden, wodurch der Substratfluss in Barrieregeweben beeinflusst wird. Eine dysregulierte SLC15A1/PEPT1-Funktion wurde u. a. im Zusammenhang mit intestinalen Entzündungen, Malabsorptionsphänotypen und einer veränderten Handhabung peptidomimetischer Verbindungen untersucht, die für Forschung in Pharmakologie und Toxikologie relevant sind.

Das PEPT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC15A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC15A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC15A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PEPT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC15A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PEPT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC15A1-Exone abzielen, die für die PEPT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC15A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PEPT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PEPT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC15A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PEPT1 HDR-Plasmid (h) und PEPT1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC15A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC15A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.