Plasmide CRISPR d'Activation (h) PDX-1: sc-400792-ACT

PDX1 code pour PDX-1, un facteur de transcription à homéoboîte qui orchestre le développement du pancréas et maintient l’identité des cellules β matures en régulant la transcription du gène de l’insuline et les programmes de différenciation endocrinienne. Dans les cellules humaines, PDX-1 intègre les signaux dépendants des nutriments et des facteurs de croissance à des réseaux transcriptionnels qui contrôlent la détection du glucose, la capacité sécrétoire et les réponses au stress cellulaire. Une activité dérégulée de PDX-1 est associée à une altération de la fonction des cellules β et à une spécification modifiée des lignages pancréatiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes liés au diabète et de la biologie du développement pancréatique. En tant que régulateur maître, PDX-1 est fréquemment utilisé pour analyser les circuits transcriptionnels qui gouvernent les décisions de destinée endocrinienne et l’homéostasie métabolique.

PDX-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PDX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PDX-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PDX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PDX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PDX-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PDX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PDX-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PDX-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PDX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.