Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDK1 (h2): sc-401084-KO-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PDK1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h2) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PDK1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PDK1 Antibody (E-10): sc-515944
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDK1 (h2) | sc-401084-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
La PDK1 humaine (pyruvate dehydrogenase kinase 1) code une kinase mitochondriale qui phosphoryle et inhibe le complexe pyruvate déshydrogénase, limitant la conversion du pyruvate en acétyl-CoA et détournant le flux de carbone du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs). En modulant l’oxydation du glucose par rapport à la production de lactate, PDK1 fait le lien entre la détection des nutriments et la reprogrammation métabolique en réponse à l’hypoxie, et favorise l’adaptation au stress oxydant. Son activité recoupe des voies métaboliques centrales, notamment la glycolyse, la respiration mitochondriale et l’anaplérose, influençant les décisions cellulaires de prolifération et de survie. Une expression ou une activité dérégulée de PDK1 a été associée à des altérations de la bioénergétique observées dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des phénotypes dépendants du métabolisme.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PDK1 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDK1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDK1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PDK1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDK1 pour l'étude de la signalisation de PDK1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PDK1 essentiels à la fonction de PDK1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDK1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PDK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PDK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDK1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PDK1 plasmide HDR (h) et le PDK1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDK1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDK1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.