PDK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-401084-KO-2

Übersicht

Humanes PDK1 (Pyruvatdehydrogenase-Kinase 1) kodiert eine mitochondriale Kinase, die den Pyruvatdehydrogenase-Komplex phosphoryliert und hemmt. Dadurch wird die Umwandlung von Pyruvat zu Acetyl‑CoA eingeschränkt und der Kohlenstofffluss vom TCA-/Citratzyklus weg verlagert. Durch die Modulation von Glukoseoxidation gegenüber Laktatproduktion verknüpft PDK1 die Nährstoffsensorik mit einer hypoxieabhängigen metabolischen Umprogrammierung und unterstützt die Anpassung an oxidativen Stress. Seine Aktivität greift in zentrale Stoffwechselwege ein, darunter Glykolyse, mitochondriale Atmung und Anaplerose, und beeinflusst damit Entscheidungen über Zellproliferation und Überleben. Eine fehlregulierte PDK1-Expression oder -Aktivität wurde mit veränderter Bioenergetik in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was PDK1 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien stoffwechselgetriebener Phänotypen macht.

Das PDK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PDK1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PDK1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PDK1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PDK1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PDK1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PDK1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PDK1-Exone abzielen, die für die PDK1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PDK1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PDK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PDK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PDK1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PDK1 HDR-Plasmid (h) und PDK1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PDK1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PDK1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.