PDIR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405741

Descripción general

PDIA5 codifica la proteína humana relacionada con la isomerasa de disulfuro PDIR, una oxidorreductasa residente del retículo endoplásmico que favorece el plegamiento oxidativo de proteínas y la isomerización de puentes disulfuro. Como miembro de la familia de las isomerasas de disulfuro de proteínas (PDI), PDIR contribuye a la proteostasis del RE al facilitar la maduración de proteínas secretadas y de membrana y al coordinarse con redes de chaperonas activadas durante la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR). La actividad de PDIA5 se entrecruza con el control de calidad del RE, la homeostasis redox y la degradación asociada al RE (ERAD), procesos que a menudo se remodelan en el cáncer, el estrés metabólico y los contextos neurodegenerativos. La alteración de la función de la familia PDI se asocia con frecuencia a un aumento de la señalización de estrés del RE y a cambios en la capacidad de la vía secretora, lo que convierte a PDIA5 en un nodo útil para estudios mecanísticos del plegamiento dependiente del estado redox.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PDIR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PDIA5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PDIA5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PDIA5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PDIR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PDIA5 para la investigación de la señalización de PDIR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PDIA5 críticos para la función de PDIR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PDIA5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PDIR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PDIR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PDIA5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PDIR (h) y el plásmido HDR PDIR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PDIA5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PDIA5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.