PDI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422099

Visão geral

P4hb codifica a isomerase de dissulfeto de proteínas (PDI), uma oxidoredutase abundante do retículo endoplasmático (RE) que catalisa a formação, a redução e a isomerização de ligações dissulfeto para dar suporte ao enovelamento e à maturação de proteínas secretadas e de membrana. A PDI atua em redes de proteostase do RE, em parceria com chaperonas e oxidoredutases, para regular o enovelamento oxidativo de proteínas e o controle de qualidade, e também contribui para a sinalização de estresse do RE e para vias da resposta a proteínas mal enoveladas (UPR). Por meio de sua atividade de troca tiol–dissulfeto e de interações com substratos mal enovelados, a PDI influencia a homeostase redox, o tráfego proteico e decisões de sobrevivência celular sob estresse proteotóxico. A atividade desregulada de P4hb/PDI tem sido associada a estados patológicos caracterizados por estresse crônico do RE e desequilíbrio redox, tornando-a um alvo relevante para estudos mecanísticos em modelos de neurodegeneração, disfunção metabólica e biologia do câncer.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PDI (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene P4hb em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do P4hb, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do P4hb na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PDI.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de P4hb para a investigação da sinalização de PDI, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) P4hb críticos para a função PDI
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos P4hb para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PDI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PDI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus P4hb. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PDI Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PDI (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia P4hb para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo P4hb definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.