Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PDH-E1α Double Nickase Plasmid (h): sc-401044-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PDH-E1α Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PDH-E1α Double-Nickase-Plasmid (h) und PDH-E1α Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PDHA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PDH-E1α: sc-377092
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PDH-E1α Double Nickase Plasmid (h) | sc-401044-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDH-E1α Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401044-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDHA1 kodiert die E1α‑Untereinheit des Pyruvatdehydrogenase(PDH)-Komplexes, der die oxidative Decarboxylierung von Pyruvat katalysiert, um Acetyl‑CoA zu erzeugen und so die Glykolyse mit dem Tricarbonsäurezyklus zu verknüpfen. Die PDH‑E1α‑Aktivität unterstützt die mitochondriale Atmung, reguliert den Kohlenstofffluss in die Lipidbiosynthese und beeinflusst über die nachgeschaltete NADH‑Produktion das Redoxgleichgewicht. PDHA1 wird durch PDH‑Kinasen und ‑Phosphatasen reguliert, die die Aktivität des PDH‑Komplexes in Abhängigkeit von Nährstoffverfügbarkeit und zellulärem Energiebedarf feinabstimmen. Störungen der PDHA1‑Funktion sind mit metabolischer Umprogrammierung und mitochondrialer Dysfunktion assoziiert und werden in Kontexten wie Laktatazidose, neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie veränderter Bioenergetik in proliferativen Krankheitsmodellen untersucht.
PDH-E1α Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PDHA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PDHA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PDHA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PDHA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.