Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PDH-E1α Plasmide Double Nickase (h): sc-401044-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PDH-E1α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PDH-E1α Double Nickase Plasmid (h) e il PDH-E1α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PDHA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PDH-E1α Antibody (D-6): sc-377092
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PDH-E1α Plasmide Double Nickase (h) | sc-401044-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDH-E1α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401044-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDHA1 codifica la subunità E1α del complesso della piruvato deidrogenasi (PDH), che catalizza la decarbossilazione ossidativa del piruvato per generare acetil-CoA e collegare la glicolisi al ciclo degli acidi tricarbossilici. L’attività di PDH-E1α sostiene la respirazione mitocondriale, regola il flusso di carbonio verso la biosintesi lipidica e influenza l’equilibrio redox attraverso la produzione a valle di NADH. PDHA1 è regolato da chinasi e fosfatasi della PDH che modulano l’attività del complesso PDH in risposta alla disponibilità di nutrienti e alla richiesta energetica cellulare. L’alterazione della funzione di PDHA1 è associata a rimodellamento metabolico e disfunzione mitocondriale, ed è studiata in contesti quali acidosi lattica, fenotipi dello sviluppo neurologico e bioenergetica alterata in modelli di malattie proliferative.
PDH-E1α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PDHA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PDHA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PDHA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PDHA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.